Внутриклеточная экспрессия IFN-gamma лимфоцитами периферической крови человека. Лимфоциты культивировали в присутствии PMA/иономицина 6 часов. Затем клетки фиксировали, пермеабилизовали и окрашивали анти-IFN-gamma и анти-CD4.
Базальный уровень цитокинов в покоящихся клетках довольно низкий, поэтому предварительно проводят стимуляцию клеток in vitro в присутствии индукторов продукции цитокинов и блокаторов внутриклеточного транспорта (брефелдин А, моненсин). Затем окрашивают поверхностные маркеры, фиксируют, пермеабилизуют клетки и добавляют антитела к внутриклеточным маркерам. Для стимуляции лимфоцитов чаще используют ФМА в комбинации с иономицином, антитела к CD3, стафилококковый энтеротоксин, для моноцитов ЛПС.
Проточная цитофлуориметрия позволяет оценить продукцию цитокина на уровне одной клетки с помощью внутриклеточного окрашивания. Комбинация внутриклеточного и поверхностного окрашивания дает возможность максимально детализировать информацию о клетке-продуценте принадлежность к классу, подклассу, функциональная активность и т.д. Для некоторых субпопуляций клеток (Th17, Th1) пока не обнаружено специфических поверхностных маркеров, поэтому исследование внутриклеточных цитокинов является единственным достоверным методом определения групповой принадлежности для этих клеток.
Детекция внутриклеточных цитокинов
14.01.2013Иммуноферментные наборы производства Mediagnost GmbHСнижена цена и получена регистрация на иммуноферментные наборы производства Mediagnost GmbH. Наборы предназначены для диагностики нарушений, связанных с процессами роста и энергетического метаболизма.
23.01.2013Снижена цена на иммуноблотыМы рады сообщить Вам о том, что, начиная с 2013 года, значительно снижена цена на иммуноблоты, предназначенные для диагностики вирусных гепатитов С и Е (Mikrogen, Германия).
на выставке XVIII Всероссийской научно-практической конференциию 'Аналитическая надежность и диагностическая значимость лабораторной медицины'
01.02.2013XVIII Всероссийская научно-практическая конференцияЗАО БиоХимМак приглашает вас посетить стенд компании
Комментариев нет:
Отправить комментарий